您现在的位置:玖富彩票_808彩票网_幸运彩票_状元彩票_传奇彩票_公主号彩票 > 手机购彩 > 人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书

人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书

2018-05-12 04:13

  本试剂盒仅供研究利用

  ELISA法定量测定人血浆,血清或其它相关液体中ACTN-3含量。

  本试剂盒使用双抗体夹心酶标免疫阐发法测定标本中ACTN-3程度。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次插手ACTN-3、生物素化的抗ACTN-3抗体、HRP标识表记标帜的亲和素,颠末完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的感化下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ACTN-3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计较样品浓度。

  试剂盒构成及试剂配制

  1.酶联板:一块(96孔)

  2.尺度品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后频频倒置/搓动以助消融,其浓度为10 mg/L,做系列倍比稀释后,别离稀释成10 mg/L, 5 mg/L ,2.5 mg/L,1.25 mg/L,0.62 mg/L,0.31 mg/L,0.15 mg/L,,其原液间接作为最高尺度浓度,样品稀释液间接作为尺度浓度0 mg/L,临用前15分钟内配制。

  如配制10 mg/L尺度品:取0.5ml 20 mg/L的上述尺度品插手含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

  3.样品稀释液:1×20ml/瓶。

  6.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前按照事后计较好的每次尝试所需的总量配制(每孔100ul),现实配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,悄悄混匀,在利用前一小时内配制。

  7.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方式同检测溶液A。

  9.浓洗涤液:1×30ml/瓶,利用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

  标本的采集及保留

  1.血清:标本请于室温放置2小时或4℃留宿后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保留,但应避免频频冻融。

  2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8 C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃保留,但应避免频频冻融。

  各试剂在利用前均衡至室温。

  1.加样:别离设空白孔、尺度孔、待测样品孔。除空白孔外,余孔别离加尺度溶液或待测样品100ul,留意不要有气泡,悄悄混匀,酶标板加上盖,37℃反映120分钟。

  2.弃去液体,甩干,不消洗涤。

  3.每孔加检测溶液A工作液 100ul,37℃,60分钟。洗板3次,350ul/每孔,甩干。

  4.每孔加检测溶液B工作液 100ul,37℃,60分钟,洗板5次,甩干。

  5.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避鲜明色30分钟(此时肉眼可见尺度品的前3-4孔有较着的梯度兰色,后3-4孔梯度不较着)。

  6.依序每孔加终止溶液50ul,终止反映(此时兰色立转黄色)。用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值)。

  1. 每次尝试留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最初加底物溶液及2NH2SO4。丈量时先用此孔调OD值至零。

  2.为防止样品蒸发,试验时将反映板放于铺有湿布的密闭盒内。

  手工洗板方式:吸去(不成触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在尝试台上铺垫几层

  吸水纸,酶标板朝下用力拍几回;将保举的洗涤缓冲液至多0.4ml注入孔内,浸泡1 http://ps-ag.net/shoujigoucai/2156/

推荐笑话段子